在做層析實驗的時候可能時常會遇到一個問題：一次實驗可以上多少樣品呢？多也不是少也不是，上樣多了會造成一部分樣品損失或者達不到預期的分離效果，上樣少了無法充分使用層析柱還要增加重復實驗或者使用更大層析柱，真是件糾結(jié)的事情。我們今天要來給大家介紹的就是不同的層析柱應(yīng)該如何確定上樣量。

　　層析柱上樣量由柱體積和所使用填料載量決定

　　柱體積（CV）：層析柱中裝填的填料的總體積，根據(jù)層析柱的截面積及填料裝填的高度計算得到。

　　載量：填料在一定條件下填料結(jié)合目的分子的能力，分為靜態(tài)載量和動態(tài)載量。

　　靜態(tài)載量（有效載量）

　　在一定的條件下，可以結(jié)合在層析填料上的真實樣品的數(shù)量，它是使用真實的樣品和介質(zhì)充分浸潤飽和，然后測定結(jié)合在填料上的樣品總量。pH、離子強度、添加劑以及樣品等因素都會影響有效結(jié)合載量。實驗條件改變，有效結(jié)合載量也會變化。

　　動態(tài)載量

　　在一定的運行條件下，可以結(jié)合在層析柱上的樣品數(shù)量。除pH，離子強度，添加劑以及樣品以外，運行流速也會影響動態(tài)結(jié)合載量。一般來說，流速越低，動態(tài)結(jié)合載量越高。如果流速接近于零，動態(tài)結(jié)合載量等于有效載量。

　　層析都是在一定流速下進行的，故填料的動態(tài)載量更能有效地用于上樣量的確定。對于特定填料或?qū)游鲋鶃碚f，說明書都會給出對于某種特定蛋白其動態(tài)結(jié)合載量，同時給出相應(yīng)的測定條件，可作為實際實驗中上樣量的參考。